Auteur/autrice : Administrateur

Rôle des populations lymphocytaires cytotoxiques circulantes dans la souffrance endothéliale au cours de la sclérodermie systémique (ScS)

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Porteuse du projet : Audrey BENYAMINE (abenyamine@ap-hm.fr)

Service de Médecine Interne, Hôpital Nord, CHU Marseille
Laboratoire d’Hématologie du Pr Françoise Dignat-George,Université d’Aix-Marseille (AMU)
Vascular Research Center of Marseille (VRCM – UMRS1076)

Objectif : définir le rôle cytotoxique des populations lymphocytaires circulantes des patients atteints de ScS vis-à-vis de l’endothélium.

 Matériels et Méthodes : Nous étudierons en cytométrie en flux :

-le pourcentage et le phénotype des populations Lymphocytaires T (LT) γδ et Natural Killer (NK) de patients ScS ex vivo (n=15) et de témoins sains (n=15) (Figure 1).
lymphocyte T

Ceci comprendra la caractérisation phénotypique des LT γδ et NK (expression de marqueurs d’activation, de récepteurs aux chimiokines, de récepteurs aux molécules d’adhésion endothéliale, de récepteurs activateurs de cytotoxicité) ;

-les interactions fonctionnelles cellules immunes cytotoxiques de patients ScS/cellules endothéliales in vitro (capacités cytotoxiques des LT γδ et NK, couples ligand/récepteur impliqués, souffrance endothéliale) (Figure 1 et 2).

LT2

Résultats attendus: Contribuer à une caractérisation fonctionnelle des Lymphocytes T γδ et cellules NK, à une meilleure compréhension des processus de lésion/régénération endothéliale et au développement de biomarqueurs cibles dans la ScS.

Financement de projet du GFRS 2015-2016 : les 2 lauréats

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L’annonce des projets de recherche retenus dans le cadre de l’appel d’offre pour financement par le GFRS, a été faite le 14 octobre 2015 à l’occasion de la journée annuelle du GFRS.

Le premier projet (Pr Jégo, Rennes) vise à caractériser la réponse des macrophages humains exposés à la silice.: voir l’article dédié.

le deuxème (Dr Benyamine, Marseille) vise à étudier l’intéraction des lymphocytes circulants sur l’endothélium au cours de la sclérodermie systémique: voir l’article dédié.

Les résultats obtenus seront présentés lors de la journée du GFRS de 2016, programmée le 23 novembre 2016 à Paris

Caractérisation de la réponse inflammatoire et pro-fibrosante des macrophages humains exposés à la silice cristalline

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Titre complet: Caractérisation de la réponse inflammatoire et pro-fibrosante des macrophages humains exposés à la silice cristalline, un contaminant environnemental impliqué dans le développement de la sclérodermie systémique

Porteur du projet : Pr. Patrick Jégo (patrick.jego@chu-rennes.fr), Service de médecine interne CHU Rennes.

La sclérodermie systémique (SSc) est une maladie auto-immune, caractérisée par une fibrose cutanée et pulmonaire et dont la survenue est favorisée par l’exposition à la silice cristalline. Les macrophages, de par leur activité de phagocytose, constituent la principale cible cellulaire de la silice et pourraient jouer un rôle majeur dans le développement de la fibrose pulmonaire. Une caractérisation globale de la réponse inflammatoire et pro-fibrosante des macrophages humains exposés in vitro à la silice cristalline serait donc particulièrement intéressante pour mieux mprendre les effets de ces particules.
Le stress oxydant est fortement impliqué dans la physiopathologie de la SSc. Ainsi, l’activation du facteur de transcription Nrf2, qui contrôle la réponse anti-oxydante, joue un rôle bénéfique dans de nombreuses pathologies respiratoires inflammatoires chroniques.

Cependant, son impact sur le développement de la SSc, notamment associée à la silice, est encore inconnu.

Dans ce contexte, ce projet vise à :

1) caractériser l’activation, par la silice, des macrophages issus de patients
2) évaluer les effets pro-inflammatoires et pro-fibrosants des macrophages
3) déterminer, dans une perspective thérapeutique, le rôle protecteur de Nrf2

Le projet, échelonné en 4 étapes majeures, est schématisé dans la figure suivante :

Patrick Jégo

Grossesse et sclérodermie systémique: Diaporama

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Diaporama Pr Luc Mouthon. Décembre 2015

Luc Mouthon a effectué cet exposé le vendredi 4 décembre 2015 lors de la première journée sclérodermie systémique du DU maladies systémiques et maladies autoimmunes de la faculté de Médecine Paris Descartes.

Les grossesses sont possibles au cours de la sclérodermie systémique, pour peu que la patiente n’ai pas d’insuffisance respiratoire évoluée, pas d’hypertension rénale sévère et pas d’insuffisance rénale importante. Dans la perspective d’une grossesse, les traitements immunosuppresseurs  sont contre-indiqués au cours de la grossesse. S’ils sont prescrits,  ils devront être remplacés par de l’azathioprine, seul traitement immunosuppresseur autorisé pendant la grossesse. Idéalement le suivi doit se faire dans une maternité de niveau 3 en lien avec une équipe médicale connaissant bien la sclérodermie systémique.

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Physiopathologie de la sclérodermie systémique

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Diaporama,  Par Le Pr Luc Mouthon, Hôpital COCHIN, Paris

A l’occasion des enseignements du master 2 international « Inflammation » sous l’égide du Labex Inflamex,  Luc Mouthon a fait un exposé en anglais dans le cadre des enseignements de l’année universitaire 2015-2016.

Les différents mécanismes d’action impliqués au cours de la sclérodermie systémique sont passés en revue.

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Identification of Rare Variants in ATP8B4 as a Risk Factor for Systemic Sclerosis by Whole-Exome Sequencing

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D’après Gao L, Emond MJ, Louie T, Cheadle C, Berger AE, Rafaels N, Vergara C, Kim Y, Taub MA, Ruczinski I, Mathai SC, Rich SS, Nickerson DA, Hummers LK, Bamshad MJ, Hassoun PM, Mathias RA; National Heart, Lung, and Blood Institute GO Exome Sequencing Project, Barnes KC.

Lien de l’article original: Arthritis Rheumatol. 2016 Jan;68(1):191-200.

 Reporter: Dr Laurence Michel

Background : En aout 2013, Okada et Plenge publiaient un éditorial dans Arthritis & Rheumatism proclamant que nous étions à l’ère «du séquençage de l’exome entier dans les pathologies rhumatismales ». Depuis, plusieurs études ont illustré le rôle fonctionnel de variants rares, identifiés par séquençage de l’exome ou de l’ensemble du génome, dans la susceptibilité et la progression des maladies auto-immunes. Dans cette étude, Gao et col. analysent la variation d’exome chez des patients atteints de sclérodermique systémique (SSc), y compris dans un sous-ensemble de patients ayant une hypertension artérielle pulmonaire (HTAP), leur but étant de déterminer la contribution de variants rares comme modificateurs génétiques de l’expressivité, la pénétrance et la gravité de la SSc.

Méthodes :

Un séquençage d’exome a été réalisé chez 78 patients américains ou européens ayant une SSc, avec 35 patients sans hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) et 43 patients atteints d’HTAP. Une association testant la probabilité cas-témoins pour des variants rares a été réalisée en utilisant le test d’association à noyau de séquences unifiées avec une pondération par critère optimal du noyau et ajustement pour échantillon de petite taille en comparant les patients SSc avec une population de référence de 3 179 contrôles de l’ensemble des 5500 données d’exome du « Exome Sequencing Project ». La réplication du génotypage a été réalisée dans un échantillon indépendant de 3 263 patients (415 patients atteints de ScS et 2 848 contrôles). Enfin, le profil d’expression de l’ARN messager a été effectué chez 61 patients atteints de sclérodermie (19 sans HTAP et 42 avec HTAP) et 41 contrôles correspondants.

Résultats :

Les résultats de cette étude cas-témoins décrivent le gène ATP8B4 (transporteur de phospholipides) comme un nouveau locus de susceptibilité et de progression de la sclérodermie, en démontrant une augmentation significative du risque de SSc avec ATP8B4 (P = 2,77 x 10-7). L’association observée entre le gène ATP8B4 et la SSc semble être induite par un seul variant faux-sens parmi les 64 variants du gène ATP8B4 testés : la mutation faux-sens c.1308 C> G (F436L, rs55687265), qui est étiquetée comme dommageable par un

algorithme bioinformatique, et associée au risque de SSc (P = 9,35 × 10-10, avec un odds ratio [OR] égal à 6,11). Ceci a été confirmé dans la cohorte de réplication (P = 0,012, OR 1,86) et une méta-analyse (P = 1,92 × 10-7, OR 2.5). D’autres gènes, notamment ceux impliqués dans le complexe ubiquitine E3 ligase-protéine (ASB10) ou encore « cyclic nucleotide gated channelopathies » (CNGB3) ainsi que HLA-DRB5 et HSPB2 (protéine de choc thermique 27) sont également associés à la SSC (P <10-7).

Une expression différentielle de l’ARNm du gène ATP8B4 dans les cellules mononucléées du sang périphérique a été observée chez les patients SSc par rapport aux témoins (P = 0,0005). Mis à part son rôle de transporteur de phospholipides, le gène ATP8B4 n’est pas bien connu et son implication dans une maladie auto-immune est nouvelle. Sa surexpression dans les cellules du sang périphérique des patients SSc ouvre de nouvelles perspectives concernant la pathogenèse de la sclérodermie et le développement de biomarqueurs.

Conclusion :

Ces données montrent que la mutation F436L et la surexpression du gène ATP8B4 sont associées à la sclérodermie chez des patients avec et sans HTAP, identifiant le gène ATP8B4 comme un facteur de risque génétique potentiel pour la SSC et ses complications vasculaires pulmonaires. De façon plus globale, elles contribuent à la masse croissante de preuves de l’implication de variants rares dans les maladies auto-immunes.

 

Mots clé (2 à 5) :SSc, HTPA, variant génétique, facteur de risque.

  • PMID: 26473621 [PubMed – in process]
  • PMCID: PMC4690763
  • doi: 10.1002/art.39449

La réunion annuelle du GFRS 2016

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Cher(e)s ami(e)s, Cher(e)s collègues,

Nous espérons que vous avez passé d’excellentes vacances et que la reprise s’est bien passée. Comme vous le savez, nous fêterons les 20 ans du GFRS le 23 novembre prochain à l’occasion de notre réunion annuelle. Pour fêter cette occasion, nous vous proposons un dîner au Restaurant « La Contre Allée » (http://contre-allee.com/).

Le montant du menu est de 60€ le GFRS  prend en charge une partie du diner. Merci de nous renvoyer par email le coupon réponse dûment rempli avant le 25 septembre avec le nombre de personnes pour un  montant donc de 20€/ personne.

Nous avons besoin, pour des raisons d’organisation que vous nous informiez par retour de courriel de votre participation à ce diner. Ci-joint le bulletin de participation à la journée et au diner.

Dans l’attente de votre réponse

Très cordialement

Luc Mouthon pour le bureau du GFRS

Vous trouverez ci dessous le programme définitif.

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La signature IFN de type I dans la Sclérodermie systémique

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Veille biographique: Recherche physiopathologique

La signature de l’interféron de type I est présente dans la sclérose systémique avant la fibrose et pourrait contribuer à sa pathogénie travers une surexpression du gène de BAFF et la synthèse augmentée de collagène

D’après : The interferon type I signature is present in systemic sclerosis before overt fibrosis and might contribute to its pathogenesis through high BAFF gene expression and high collagen synthesis: Proposée  par le Dr Laurence MICHEL, INSERM U976. Centre Universitaire de Recherche en Dermatologie.

Auteurs: Brkic Z, van Bon L, Cossu M, van Helden-Meeuwsen CG, Vonk MC, Knaapen H, van den Berg W, Dalm VA, Van Daele PL, Severino A, Maria NI, Guillen S, Dik WA, Beretta L, Versnel MA, Radstake T

Lien  pubmed: http://www.ncbi.nlm.nih.gov.gate2.inist.fr/pubmed/26371289

Distribution du score « Interféron de type I » (IFN score) chez les patients atteints d’une sclérodermie cutanée limitée (lcSSc) ou diffuse (dcSSc) versus des contrôles sains (HC). Les cas positifs sont en rouge.

Distribution du score « Interféron de type I » (IFN score) chez les patients atteints d’une sclérodermie cutanée limitée (lcSSc) ou diffuse (dcSSc) versus des contrôles sains (HC). Les cas positifs sont en rouge.

Background :

Cet article étudie la « signature IFN de type I » caractéristique des maladies autoimmunes, dans les stades précoces de la sclérodermie systémique (SSc), avant qu’une fibrose cutanée ne se développe.

Méthodes :

L’expression de 11 gènes induits par l’IFN de type I a été testée dans le sang total provenant de 30 témoins sains sans aucun signe d’autoimmunité, chez 12 sujets ayant un phénomène de Raynaud primaire, 19 patients avec une SSc très précoce, 7 patients avec une SSc sans fibrose cutanée, 21 avec une SSc cutanée limitée et 10 sujets avec une SSc cutanée diffuse. De plus, une corrélation entre l’activité de l’IFN dans les monocytes, l’expression de l’ARNm de BAFF (B cell activating factor) et les taux sériques de la fraction N-terminale du propeptide du procollagène III (PIIINP) a été testée.

Résultats :

chez tous les patients SSc, quel que soit le groupe, une signature IFN de type I élevée est détectée, avant même que la fibrose n’apparaisse. Un « score IFN » calculé à partir des taux d’ARNm des gènes associés à l’IFN permet d’établir une prévalence de cette signature : Témoins=3.3%; Raynaud=33.3%, SSc très précoce=78.9%, SSc sans fibrose=100%, SSc cutanée limitée =42.9%, SSc cutanée diffuse =70.0%. Dans les monocytes, un score IFN ≥4.12 distingue les contrôles des patients atteints de SSc avec une fibrose. De plus, les monocytes des patients ayant une signature IFN expriment des taux d’ARNm de BAFF que les monocytes des patients sans signature IFN, ceci étant corrélé à des taux de PIIINP sériques significativement plus élevés.

Conclusion :

Une signature IFN de type I est détectable chez les patients atteints de SSs dès premières phases de la maladie, avant même l’apparition d’une fibrose cutanée, ce quisuggère une contribution de cette signature dans la pathogenèse et la progression de la SSC via une stimulation de l’autoimmunité et de la fibrose.

Analyse profonde du protéome et CXCL4 comme biomarqueur dans la sclérodermie systémique

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Veille biographique. D’après : Proteome-wide Analysis and CXCL4 as a Biomarker in Systemic: Proposée par le Pr Brigitte GRANEL, Marseille

Auteurs: L. van Bon, A.J. Affandi, J. Broen, R.B. Christmann, R.J. Marijnissen, L. Stawski, Farina, G. Stifano, A.L. Mathes, M. Cossu, M. York, C. Collins, M. Wenink, R. Huijbens, R. Hesselstrand, T. Saxne, M. DiMarzio, D. Wuttge, S.K. Agarwal, J.D. Reveille, S. Assassi, M. Mayes, Y. Deng, J.P.H. Drenth, J. de Graaf, M. den Heijer, C.G.M. Kallenberg, M. Bijl, A. Loof, W.B. van den Berg, L.A.B.Joosten, V. Smith, F. de Keyser, R. Scorza, C. Lunardi, P.L.C.M. van Riel, M. Vonk, W. van Heerde, S. Meller, B. Homey, L. Beretta, M. Roest, M. Trojanowska, R. Lafyatis, and T.R.D.J. Radstake   http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4040466/

Background : L’identification de biomarqueurs associées à la sévérité ou la progression de la sclérodermie présente un intérêt majeur dans la prise en charge des patients dont la présentation clinique et l’évolution restent très hétérogènes. A ce jour, il n’y a pas de facteur prédictif d’atteinte viscérale. Le but de cette étude était d’identifier un rôle possible des cellules dendritiques plasmacytoïdes dans la pathogénèse de la sclérodermie.

Méthodes :

– 779 patients souffrant de sclérodermie (462 ayant une forme cutanée limitée, 317 avec la forme cutanée diffuse) pour la cohorte prinicpale.
– Pour l’étude de l’expression de CXCL4 dans les cellules dendritiques plasmacytoïdes, des biopsies de peau étaient obtenues chez les patients avec la forme diffuse précoce et diffuse tardive.
– Le dosage plasmatique de CXCL4 était obtenu chez les patients atteints de sclérodermie dans différentes cohortes étudiées, chez les sujets sains, les patients lupiques, les patients avec une spondylarthrite ankylosante et une cirrhose hépatique.
– Une analyse protéomique était réalisée dans le surnageant des  cellules dendritiques plasmacytoïdes.
– La quantification des cytokines sécrétées était faite par test ELISA ou  Luminex.

Résultats :

L’analyse protéomique a montré que les cellules dendritiques plasmacytoïdes des patients avec la forme précoce et diffuse de la maladie secrétaient de façon différentielle par rapport aux témoins
sains des taux élevés de CXCL4. Des expériences de confirmation ont montré une élévation importante du CXCL4 (dosage ELISA) dans le surnageant des cellules dendritiques chez les patients
ayant une sclérodermie, en particulier la forme diffuse précoce, ainsi qu’une surexpression de l’ARN messager de CXCL4 dans les cellules dendritiques purifiées et une augmentation de la protéine CXCL4 dans les cellules dendritiques circulantes et de la peau des patients ayant une sclérodermie dans sa forme diffuse précoce.

Dans la cohorte de patients, le taux circulant de CXCL4 était très élevé en comparaison avec les sujets sains et étaient particulièrement élevé dans la forme diffuse précoce. Les mêmes résultats étaient observés dans la cohorte de réplication comprenant des patients avec sclérodermie, des sujets sains, des lupus, spondylarthrite ankylosante et cirrhose hépatique. Les patients sclérodermiques avec un taux élevé de CXCL4 avaient davantage de fibrose pulmonaire et d’hypertension artérielle pulmonaire.

L’analyse d’association entre le taux de CXCL4 et le phénotype retrouvait une corrélation entre CXCL4 et l’extension de la fibrose cutanée. Les patients avec des taux circulants élevés de CXCL4 (≥10 ng/mL) avaient davantage de fibrose pulmonaire et d’hypertension artérielle pulmonaire. Des taux élevés de CXCL4 étaient associés à un développement précoce de l’hypertension artérielle
pulmonaire.

Dans une cohorte suivie sur 18 moins, les auteurs montrent l’intérêt de CXCL4 comme biomarqueur capable de prédire l’altération de la DLCO (diffusion pulmonaire du monoxyde de carbone), une plus grande prévalence de fibrose pulmonaire au scanner et une plus grande progression de la fibrose cutanée.

Conclusion :

les auteurs ont ainsi identifié un biomarqueur, le CXCL4, intéressant dans la sclérodermie car associé  à la forme diffuse précoce, au développement de la fibrose pulmonaire et l’hypertension artérielle pulmonaire. Ce marqueur semble intéressant en tant que facteur pronostic de sévérité de la maladie. CXCL4 est une chémokine aux effets anti-angiogéniques, profibrosantes et proinflammatoires. Les taux élevés de CXCL4 observés dans la sclérodermie pourraient expliquer au moins en partie le défaut de réparation vasculaire de la maladie, l’inflammation et le développement de la fibrose.

Sclérodermie systémique & réanimation médicale

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Luc-Mouthon-rvb-inflamex-150x150Pr Luc Mouthon
Service de Médecine Interne, Hôpital Cochin

Octobre 2015

 

Il arrive que se discute pour un patient sclérodermique un passage en réanimation médicale. Peu d’études sont disponibles qui permettent de déterminer le pronostic des patients sclérodermiques hospitalisés en réanimation médicale. Luc Mouthon expose les différentes situations cliniques pouvant amener à discuter un tel transfert et rapporte les résultats d’une étude rétrospective récemment menée en collaboration avec le service de réanimation médicale de l’hôpital Cochin.

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